Marcaje in vitro de hematíes con 99mTc

Última actualización: 28 de septiembre de 2022

Procedimiento

1. Preparar una jeringa de 5 ml con 0,6 ml de ACD-A y extraer 4 ml de sangre depositándola en un tubo de poliestireno de 50 ml de fondo cónico y tapón de rosca.

   Se recomienda el uso del anticoagulante ACD-A en lugar de heparina. Las imágenes que se obtienen utilizando hematíes marcados con ^99mTc y heparina muestran una mayor actividad renal y urinaria.

2. Preparar una disolución de pirofosfato de estaño de concentración 10 µg de Sn²⁺/ml siguiendo las instrucciones del fabricante del equipo reactivo.

3. Añadir 250 µl de la disolución de pirofosfato de estaño, siempre que el generador de ⁹⁹Mo/^99mTc haya sido eluido en las últimas 24 horas. En caso contrario, añadir 500 µl.

   No se ha podido determinar con exactitud la concentración de Sn²⁺ que proporciona la máxima eficiencia de marcaje ya que depende de las variables que intervienen en el proceso: paciente (hematocrito, concentración de proteínas plasmáticas, medicación, etc.) y tiempo transcurrido desde la última elución del generador (masa de Tc, radiolisis, etc.). No obstante, con las concentraciones de Sn²⁺ recomendadas se obtiene un correcto marcaje.

4. Incubar 10 min a temperatura ambiente con agitación ocasional suave.

5. Resuspender los hematíes con 40 ml de disolución salina fisiológica. Centrifugar 10 min a 1000 · g . Extraer y desechar el sobrenadante.

   La utilización de un gran volumen de disolución salina fisiológica permite, con una sola centrifugación, la eliminación prácticamente total del exceso de Sn²⁺ acortando el tiempo de marcaje.

   La presencia de trazas de Sn²⁺ extracelular acarrearía la reducción del pertecnetato en el exterior de la célula. El tecnecio, una vez reducido, es incapaz de atravesar la membrana celular lo que se traduciría en un descenso del rendimiento de marcaje.

6. Añadir el volumen requerido de ^99mTcO4-, que contenga entre 185 y 1295 MBq, dependiendo del tipo de exploración.
7. Incubar 10 min a temperatura ambiente agitando suavemente 2 ó 3 veces.

8. Resuspender los hematíes con 40 ml de disolución salina fisiológica y centrifugar 10 min a 1000 . g.

   La utilización de un gran volumen de disolución salina fisiológica permite, con una sola resuspensión y centrifugación, la eliminación, prácticamente total, del ^99mTc no fijado a los hematíes.

9. Extraer el sobrenadante, pasarlo a otro tubo de poliestireno de fondo cónico con tapón de rosca y reservarlo para el cálculo del rendimiento del marcaje.
10. Resuspender los hematíes marcados con, aproximadamente, 4 ml de disolución salina fisiológica.
11. Efectuar los cálculos del rendimiento de marcaje.
12. Inyectar el volumen con la actividad requerida para la exploración.

Reactivos

Acido-citrato-glucosa, fórmula A (ACD-A)

Ver monografía «Anticoagulantes y conservantes para sangre humana, disoluciones de», nº 209, de la 1ª Edición de la Real Farmacopea Española.